羊人工受精技术
2012年10月12日 14:41 来源：农博网
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人工授精技术可分两类三种方法：第一类为液态精液人工授精技术，又可分为二种方法，①鲜精或1∶2～4低倍稀释精液人工授精技术，一只公羊一年可配母羊500～1000只以上，比用公羊本交提高10～20倍以上。用这种方法，将采出的精液不稀释或低倍稀释，立即给母羊输精，它适用于母羊季节性发情较明显，而且数量较多的地区。②精液1∶20～50，高倍稀释人工授精技术，一只公羊一年可配种母羊10000只以上，比本交提高200倍以上。如江苏省海门市，地处长江三角洲，交通便利，多年来，利用这一技术，全市只有一个改良站制作高倍稀释精液，每乡镇设立输精点，实行统一供精，一只公羊每年配种母羊10000～15000只，精期受胎率可达90%。液态精液如果组织得不好，或在山区及交通不便而母羊较少的地区，会出现精液用不完而浪费的现象。降低了精液的利用率。第二类为冷冻精液人工授精技术，可把公羊的精液常年冷冻贮存起来，在任何地方、时间都可使用。如制作颗粒冷冻精液，一只公羊一年所采出的精液可冷冻10000～20000粒颗粒，可配母羊2500～5000只。精液用多少可解冻多少，不会造成浪费。但受胎率较低，高者在50%以上，低的只有30%～40%，其成本高，效果较差。
现将具体操作技术分述如下：
一、采精前的准备
1.种公羊采精调教
一般说，公羊采精是较容易的事情，但有些波尔山羊公羊，尤其是初次参加配种的公羊，就不太容易采出精液来，可采取以下措施：
①.同圈法：将不会爬跨的公羊和若干只发情母羊关在一起过几夜，或与母羊混群饲养几天后公羊便开始爬跨。
②.诱导法：在其他公羊配种或采精时，让被调教公羊站在一旁观看，然后诱导它爬跨。
③.按摩睾丸：在调教期每日定时按摩睾丸10～15分钟，或用冷水湿布擦睾丸，经几天后则会提高公羊性欲。
④.药物刺激：对性欲差的公羊，隔日每只注射丙睾丸素1～2毫升，连注射3次后可使公羊爬跨。
⑤.将发情母羊阴道沾液或尿液涂在公羊鼻端，也可刺激公羊性欲。
⑥.用发情母羊做台羊。
⑦.调整饲料，改善饲养管理，这是根本措施，若气候炎热时，应进行夜牧。
2.器械洗涤和消毒
人工授精所用的器械在每次使用前必须消毒，使用后要立即洗涤。新的金属器械要先擦去油渍后洗涤。方法是：先用清水冲去残留的精液或灰尘，再用少量洗衣粉洗涤，然后用清水冲去残留的洗衣粉，最后用蒸馏水冲洗1～2次。
(1).玻璃器皿消毒：将洗净后的玻璃器皿倒扣在网篮内，让剩余水流出后，再放入烘箱，在115℃下消毒30分钟。可用消毒杯柜或碗柜消毒，价格便宜、省电。消毒后的器皿透明，无任何污渍，才能使用，否则要重新洗涤、消毒。
(2).开腔器、温度计、镊子、磁盘等消毒：洗净、干燥后，在使用前1.5小时，用75%液精棉球擦试消毒。
3.假阴道的按装、洗涤和消毒
先把假阴道内胎(光面向里)放在外壳里边，把长出的部分(两头相等)反转套在外壳上。固定好的内胎松紧适中、匀称、平正、不起皱折和扭转。装好以后，在洗衣粉水中，用刷子刷去粘在内胎外壳上的污物，再用清水冲去洗衣粉，最后用蒸馏水冲洗内胎1～2次，自然干燥。
在采精前1.5小时，用75%酒精棉球消毒内胎(先里后外)待用。
附：配制75%酒精，用购买的医用酒精，一般为95%浓度，取其79毫升，加蒸馏水21毫升即为75%浓度的酒精。
二、采精
1.选择发情好的健康母羊作台羊，后躯应擦干净，头部固定在采精架上(架子自制，离地发情通一个羊体高)。训练好的公羊，可不用发情母羊作台羊，还可用公羊作台羊、假台羊等都能采出精液来。
2.种公羊在采精前，用湿布将包皮周围擦干净。
3.假阴道的准备：将消毒过的，酒精完全挥发后的内胎，用生理盐水棉球或稀释液棉球从里到外的擦试，在假阴道一端扣上消毒过并用生理盐水或稀液冲洗后甩干的集精瓶(高温低于25℃时，集精瓶夹层内要注入30℃～35℃温水)。在外壳中部生水孔注入150毫升左右的50℃～55℃温水，拧上气卡塞，套上双连球打气，使假阴道的采精口形成三角形，并好气卡。最后把消毒好的温度计插入假阴道内测温，温度在39℃～42℃为宜、在假阴道内胎的前1/3，涂抹稀释液或生理盐水作润滑剂(可不用凡士林，经多年实践不用任何润滑剂，不影响公羊射精)。就可立即用于采精。
4.采精操作
采精员蹲在台羊右侧后方，右手握假阴道，气卡塞向下，靠在台羊臀部，假阴道和地面约呈35度角。当公羊爬跨、伸出阴茎时，左手轻托阴茎包皮，迅速地将阴茎导入假阴道内，公羊射精动作很快，发现抬头、挺腰、前冲，表示射精完毕，全过程只有几秒钟。随着公羊从台羊身上滑下时，将假阴道取下，立即使集精瓶的一端向下坚立，打开气卡活塞，放气卡取下集精瓶(不要让假阴道内水流入精液，外壳有水要擦干)，送操作室检查。采精时，必须高度集中，动作敏捷、做到稳、准、快。
5.种公羊每天可采精1～2次，采3～5天，休息一天。必要时每天采3～4次。二次采精后，让公羊休息2小时后，再进行第三次采精。
三、精液品质检查
精液品质检查项目很多，这里只介绍几种常用的项目
①.肉眼观察：正常精液为乳白色，无味或略带腥味。凡带有腐败味，出现红色、褐色、绿色的精液均不可用于输精。公山羊正常的射精量范围是0.5～2.0毫升，平均为1.0毫升。
②.精子活率检查在载玻片上滴原精液或稀释后的精液1滴，加盖玻片，在38℃显微镜温度下(可按显微镜大小，自制保温箱，内装40瓦灯泡1只，既照明又保温)检查。精子运行方式：有直线前进运动，回旋运动和摆动三种。评定精子活率以直线前进运动精子百分率为依据，通常是用十级评分法。大约有80%的精子做直线前进运动的评为0.8，有60%精子做直线前进运动的为0.6，依次类推。山羊原精液活率一般可达0.8以上。但新引进的波尔山羊第一年使用活率往往较差,原精活率只有0.6,第二年就提高了。
在检查(评定)精子活率时，要多看几个视野，并上下扭动显微镜细螺旋，观察上、中、下三层液层的精子运动情况，才能较精确的评出精子的活率。
③.密度检查
估测法：在检查精子活率的同时进行精子密度的估测。在显微镜下根据精子稠密程度的不同。
将精子密度评为“密”、“中”、“稀”三级、“密”级为精子间空隙不足一个精子长度，“中”级为精子间有1～2个精子长度空隙，“稀”级为精子间空隙超过2个精子长度以上，“稀”级不可用于输精。
精小计数法：用血细胞计算板较精确的计算出每毫升精液中的精子数，在精液高倍稀释时，要以精子数和精子活率来计算出精液稀释倍数。计算方法是：用红细胞吸管、 取原精液至0.5刻度处，再吸入3%的氯化钠溶液至101刻度处，将原精液稀释200倍。以母指及食指分别按吸管的两端摇均，然后弄去吸管前数滴，将吸管尖端放在计算板与盖玻片之间的空隙边缘，使吸管中的精液流入计算室(高0.1毫米)，充满其中。计算板中央用刻线分成25个正方形大格，共由400个小方格组成，面积为1平方毫米。在200、400倍显微镜下数出五个大方格(四角各一个，再加中央一个大方格，共80个小方格)内的精小数。计算时以精子头部为准，位于大方格四边线条上的精子，只数相邻两边的精子，避免重复。数出四个大方格的精子总数后加7个。即为1毫升原精液的精子数。
每毫升山羊精液中含精子数为10～50亿，平均为30亿。精子计数可10～15天进行1次。有条件的地方可用密度仪器测定。
四、液态精液稀释配方与配制
1.精液低倍稀释的稀释液，在精液采出后，原精数量不够时，可作低倍稀释，密度仪器测定。满足需要，并在短时间内使用，稀释液配方可简单些。如生理盐水；奶类稀释液：用鲜牛、羊奶，水浴92℃～95℃消毒15分钟,冷却去奶皮后即可使用。凡用于高倍稀释精液的稀释液,都可作低倍稀释用。
2.精液高倍稀释的稀释液，不但是为了扩大精液量，而要延长精子的保存时间，配方很多，现介绍2个稀释液。
(1)葡萄糖3克，柠蒙酸钠1.4克，EDTA(乙二胺四乙酸二钠)0.4克，加蒸馏水至100毫升，溶解后水浴煮沸消毒20分钟，冷却后加青霉素10万单位，链霉素0.1克，若再加10～20毫升卵黄，可延长精子存活时间。
(2)葡萄糖5.2克、乳糖2.0克、柠檬酸钠0.3克，EDTA0.07克，三墓0.05克，蒸馏水100毫升，溶解后煮沸消毒20分钟，冷却后加庞庆大霉素1万单位，卵黄5毫升。
五、液态精液稀释
原精液活率在0.6以上万可用于稀释输精。
1.精液低倍稀释，原精液量够输精时，可不必再稀释，可以直接用原精直接输精。不够时按需要量作1∶2～4倍稀释，要把稀释液加温到30℃，再把它缓慢加到原精液中，摇匀后即可使用。
2.精液高倍稀释，要以精子数、输精剂量、每一剂量中含有1000万个前进运动精子数，结合下午最后输精时间的精子活率，来计算出精液稀释比例，在30℃下稀释(方法同前)。
六、分装、保存和运输
精液低倍稀释，就近输精，把它放在小瓶内，不需降温保存，短时间用毕。
1.分装保存
(1)小瓶中保存；把高倍稀释清液，按需要量(数个输精剂量装入小瓶，盖好盖，用蜡封口，包裹纱布，套上塑料袋，放在装有冰块的保温瓶(或保存箱)中保存，保存温度为0℃～5℃。
(2)塑料管中保存：作者等把精液以1∶40倍稀释，以0.5毫升为一个输精剂量，注入饮料塑料吸管内(剪成20厘米长，紫外线消毒)，两端用塑料封口机封口，保存在自制的泡沫塑料的保存箱内(箱底放冻好的冰袋，再放泡沫塑料隔板，把精液管用纱布包好，放在隔板上面，固定好)盖上盖子，保存温度大多在4℃～7℃，最高到9℃。精液保存10小时内使用，这种方法，可不用输精器了，经济实用。
2.运输
不论那种包装，精液必须固定好，尽可能减轻振动。若用摩托车送精液，要把精液箱(或保温瓶)放在背包中，背在身上。若乘汽车送精液，最好把它抱在身上。
七、冷冻精液制作技术
制作冷冻精液，要有很多设备，好在各省、区都有精液冷冻站，可用它来兼冻波尔山羊精液，不需增加设备，有的站已经开始冷冻波尔山羊精液，并取得较好的效果。作者等研究成功的80年代在北京市门头沟区冷冻绒山羊精液，获得情期受胎率73%的好结果，现介绍给大家，供参考。
1.稀释液配方与配制
Ⅰ液 葡萄糖3克、柠檬酸钠3克，加蒸馏水至100毫升，溶解后，水浴煮沸消毒20分钟，冷却后加青霉素10万单位，链霉素0.1克，取80毫升加卵黄20毫升。
Ⅱ液 取Ⅰ液44毫升，加甘油6毫升。
2.精液冷冻制作
采出的精液，检查活率在0.6以上者即可冷冻，在30℃下用Ⅰ液(30℃)进行1∶1.5倍稀释，包上8层纱布放在4℃冰箱中预冷降温2～小时，在4℃下加与Ⅰ液等量的含甘油的Ⅱ液，摇匀，最终稀释比例为1∶３倍稀释，立即在氟板上滴冻成0.1毫升的颗粒。取本稀释液Ⅰ液94毫升，加甘油6毫升，合成一液，就可以冷冻细管精液。
八、母羊发情鉴定
1.以母羊发情外部表现来判断母羊发情
本地母山羊发情外部表现较明显，发情时发出叫声，食欲减退，兴奋不安，对外界刺激反应敏感，摇头摆尾，有交配欲，喜欢接近公羊，在公羊追赶爬跨时常站立不动，让公羊交配；阴门肿大，流出粘液。从母羊发情的外部表现来判断母羊是否发情是比较容易的。但养羊户往往不注意，就不能确知母羊的发情开始时间，给适时输精造成困难。
2.试精
用试精公羊试情，能准确找出发情母羊，做到适时输精。最简便的方法是，在试情前将公羊腹部带兜上试情布(长40～45厘米，宽35～40厘米，四角缝上25～30厘米长的带子)，每日早晨一次或早晚各一次将公羊放入母羊群中试情。当母羊接受公羊爬跨，站立不动，或母羊围着公羊旋转，并不断摇尾，都是母羊发情的表现，及时把它抓出，待配。
3.试情公羊选择和饲养管理
试情公羊必须选择体质结实、健康无病，性欲旺盛，动作灵敏的1～5岁公羊。试情公羊与母羊的比例以1∶30～40为宜。在配种前一个月驱虫，加强饲养管理，除放牧采食或舍饲喂草外，每天补饲0.2～0.3公斤混合精料。每隔10～15天，给试情公羊排精一次，增强性欲。
九、输精
1.输精时间
适时输精，对提高母羊的受胎率十分重要。山羊的发情持续时间为24～48小时。排卵时间一般多在发情后期30～40小时。因此，比较适宜的输精时间应在发情中期后(即发情后12～16小时)。如以母羊外部表现来确定母羊发情的，若上午开始发情的母羊，下午与次日上午各输精1次；下午和傍晚开始发情的母羊，在次日上下午各输精1次。每天早晨1次试情的，可在上下午各输精1次。2次输精间隔8～10小时为好，至少不低于6小时。若每天早晚各1次试情的，其输精时间与以母羊外部表现来确定母羊发情相同。如母羊继续发情，可再行输精1次。
2.母羊保定
本文介绍一种不需输精架的倒立保定法，它没有场地限制，任何地方都可输精。保定人将母羊头夹紧在两腿之间，两手抓住母羊后腿，将其提到腹部，保定好不让羊动，母羊成倒立状。用温布把母羊外阴部擦干净，即待输精
3.输精方法
(1).子宫颈口内输精：将经消毒后在1%氯化钠溶液浸涮过的开膣器装上照明灯(可自制)，轻缓地插入阴道，打开阴道，找到子宫颈口，将吸有精液的输精器通过开膣器插入子宫颈口内，深度约1厘米左右。稍退开膣器，输入精液，先把输精器退出，后退出开膣器。进行下只羊输精时，把开膣器放在清水中，用布洗去粘在上面的阴道粘液和污物，擦干后再在1%氯化钠溶液浸涮过；用生理盐水棉球或稀释液棉球，将输精器上粘的粘液，污物自口向后擦去。
(2).阴输精：将装有精液的塑料管从保存箱中取出(需多少支取多少支，余下精液仍盖好)，放在室温中升温2～3分钟后，将管子的一端封口剪开，挤1小滴镜检活率合格后，将剪开的一端从母羊阴门向阴道深部缓慢插入，到有阻力时停止，再剪去上端封口，精液自然流入阴道底部，拔出管子，把母羊轻轻放下，输精完毕，再进行下只母羊输精。
装在小瓶中保存的高倍稀释精液，要用输精器吸入后再输精(余下精液仍在0～5℃下保存)，可作子宫颈口内或阴道输精。液态精液情期受胎率方，80%以上。有人做过试验，阴道输精的情期受胎率比子宫颈口内输精的降低不到2%。所以说情期液态精液可以阴道输精，而且塑料管又可代替输精器，便于推广应用。冷冻精液必须进行子宫颈口内输精，否则会降低受胎率。有条件用腹腔镜子宫角内输精，能使冷冻精液受胎率提高。
4.输精量
原精输精每只羊每次输精0.05～0.1毫升，低倍稀释为0.1～0.2毫升，高倍稀释为0.2～0.5毫升，冷冻精液为0.2毫升以上。
5.冷冻精液解冻
解冻好坏对解冻后活率有很大影响。本人采用40℃水温解冻颗粒精液，先把小试管用维生素B12(每支含0.5毫克)冲洗一下，留一点B12，并快速在40℃水中摇动至2/3融化，取出试管继续速摇至全部融，解冻后活率较好，可试试。 另外，建议做一个泡沫塑料小盒，倒上液氮，再把冷冻精液袋放入氮液中，这样可避免未解冻的颗粒精液，因升温又入液氮降温，影响活率。
十、所需器材、药品、用品、表格
1.所需器材、药品、用品
所需物品大部分已在文章中提到了。用于配制稀释液的药品、试剂：如葡萄糖要一水的、柠檬酸钠、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)都要分析纯的，青、链霉素不要过期的，卵黄需新鲜鸡蛋，要用不加水的鲜奶。假阴道内胎，玻璃器皿易破损的物品要多准备一些。显微镜保温箱、开膣器照明灯、精液保存箱等能自己做的尽可能自己做，在实践中要有所创新。如要开展冷冻精液输精，要配备好液氮罐。
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